微卫星不稳定性（MSI）概述

• 定义：短串联重复DNA序列（微卫星）中插入和缺失变异的积累
• 与MMR的关系：DNA错配修复系统（MMR）功能丧失后出现高水平MSI
• 临床意义：与化疗耐药、免疫检查点阻断反应相关，是林奇综合征（LS）的生物标志物

指南目的

• 为评估实体瘤MMR状态的MSI分析提供最新建议
• 明确术语并回顾常见方法

引言

• 错配修复系统（MMR）的组成与功能
• 错配修复缺陷（dMMR）的临床意义
• 微卫星不稳定性（MSI）检测的目的与范围

方法

• 指南制定的必要性
• 工作组的组成与会议安排
• 文献回顾与讨论要点
• 推荐等级的定义
• 社区咨询与指南修订

术语与常见MSI分析方法

术语

• MSI-H：指示dMMR，样本可描述为微卫星不稳定或MSI阳性
• MSS：无微卫星插入缺失变异，指示pMMR，样本可描述为MSI阴性
• MSI-L：片段长度分析检测到的微卫星插入缺失变异适度增加，通常指示pMMR
• MSI-I：测序分析中用于表示结果不确定
• dMMR/pMMR：可用于描述MSI分析或其他评估MMR功能方法的结果

常见分析方法

• 片段长度分析（FLA）：通过电泳分离PCR扩增的微卫星片段，检测插入缺失变异。需专家解释，常需匹配正常DNA；原理与发展、分类标准、优缺点
• 测序分析：利用下一代测序数据，通过多种算法量化MSI。需专业实验室和计算基础设施，可并行分析其他遗传标记；方法多样性、分类阈值、优缺点
• 高分辨率熔解曲线分析（HRM）：利用PCR扩增子熔解特性变化检测微卫星插入缺失变异。成本与FLA相似，分析自动化；通过PCR扩增子熔解特性变化检测微卫星插入缺失变异，使用双链DNA结合荧光团评估DNA熔解，将扩增子熔解曲线与MSS样本参考进行比较，分析单核苷酸重复MSI标记，可在同一管中跟随PCR且自动化，每个样本操作和运行时间<3小时，可扩展性受批量大小限制
• 免疫组织化学（IHC）：可视化MMR蛋白表达，是dMMR的高度敏感和特异生物标志物。需专家病理学家解释，与MSI分析有一定不一致性；可视化肿瘤组织中MMR蛋白表达，一种或多种蛋白染色缺失指示dMMR，广泛可用，周转时间快，需要专家病理学家进行结果解释，与MSI分析结果存在一些不一致性

MSI分析方法学与验证建议

• 评估MSI标记的种系变异，分析多态性标记时需匹配正常DNA
• 仅使用单核苷酸重复进行MSI分析，分析其他类型重复需报告例外情况
• 使用多个MSI标记面板，最少使用5个标记
• 针对每种肿瘤类型分别验证MSI检测方法，非胃肠道肿瘤使用IHC作为参考方法
• 验证MSI检测时不使用肿瘤突变负荷和突变特征作为参考方法
• 解决MSI检测与其他dMMR检测结果不一致的问题
• 为新的实验室开发测试选择合适的MSI标记
• 评估MSI标记的种系变异时考虑种族差异，分析多态性标记时需匹配正常DNA以排除种系变异，需报告例外情况
• 仅使用单核苷酸重复进行MSI分析以避免对MSH6缺陷的敏感性降低，需报告例外情况
• 使用多个MSI标记面板，最少使用5个以最大限度减少种系变异和随机体细胞突变的影响，需报告例外情况
• 针对每种肿瘤类型分别验证MSI分析方法，非胃肠道肿瘤使用IHC作为参考方法，需报告例外情况
• 不使用肿瘤突变负荷和突变特征作为MSI检测验证的参考方法
• 通过独立方法解决MSI检测与其他dMMR检测结果的不一致问题
• 不为新技术假设不同检测的MSI标记具有等效的敏感性和特异性，为所用技术选择标记

MSI分析结果报告建议

• 报告未遵循建议时的方法局限性和临床解释影响
• 报告样本的肿瘤细胞含量和替代组织学情况及临床解释影响
• 报告结直肠癌和子宫内膜癌MSS/MSI-H结果时说明林奇综合征诊断可能性
• 可在报告中包括MSI-H结直肠癌和子宫内膜癌的额外检测结果以支持LS诊断可能性的解释
• 报告MSI分析结果的局限性
• 报告样本的肿瘤细胞含量和替代组织学
• 报告结直肠癌和子宫内膜癌的林奇综合征诊断可能性
• 报告其他癌症的林奇综合征诊断可能性
• 报告任何癌症对免疫检查点抑制剂治疗的反应可能性
• 不将MSI-L/MSI-I结果解释为MMR功能或反应的证据
• 如有可用，报告MMR免疫组化结果以辅助解释MSI分析结果
• 当不遵循建议1-4时在报告中包含 caveats，具体说明局限性和临床意义
• 在报告中评论肿瘤细胞含量、替代组织学及其临床意义，肿瘤细胞含量不足时请求新样本或探索替代dMMR检测
• 为结直肠癌和子宫内膜癌的MSS/MSI-H结果包含林奇综合征诊断可能性的陈述
• 可为MSI-H结直肠癌和子宫内膜癌包含额外检测（如BRAF、MLH1启动子高甲基化）的激活或结果以支持林奇综合征可能性解释
• 可为非结直肠、非子宫内膜癌的MSS/MSI-H结果包含林奇综合征诊断可能性的陈述（考虑相关指南）
• 为任何癌症的MSS/MSI-H结果包含对免疫检查点抑制剂治疗反应可能性的陈述（考虑相关指南）
• 不将MSI-L/MSI-I结果解释为MMR功能/缺陷或对ICI治疗反应的证据，可解释为增加林奇综合征诊断的可能性
• 如相关且可用，在报告中包含MMR IHC结果以辅助MSI分析结果解释

讨论

• 指南的目的与重点
• 推荐的技术优势
• 报告指南的临床关联
• LS筛查的重点肿瘤类型
• dMMR的其他临床意义

推荐总结

• 推荐内容总结于表1
• 提供诊断和报告工作流程（图4）

指南概述

• 常见术语和方法概述
• 15条最佳实践推荐

推荐目的

• 减轻不同MSI分析方法的主要技术限制

具体推荐内容

• 推荐使用单核苷酸重复MSI标记物组合检测MSH6缺陷肿瘤的MSI，与近期ESMO指南一致
• 非胃肠道肿瘤的MSI分析方法应根据MMR IHC进行验证，与近期CAP/ASCO指南一致

报告指南

• 关注dMMR癌症的两个临床关联：ICI治疗反应和LS风险

LS筛查推荐

• 聚焦结直肠癌和子宫内膜癌

其他注意事项

• dMMR在特定肿瘤类型中可能有其他临床意义，本指南未讨论

其他信息

• 致谢
• 作者贡献
• 资金来源
• 利益冲突
• 伦理批准
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